1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

卵菌是一类具有独特分类地位的茸鞭生物，能够引起多种植物的毁灭性病害。疫霉菌(phytophtha) 隶属于卵菌，可以引起包括大豆疫霉、辣椒疫霉、橡树疫霉等多种作物的疫病，对经济造成了巨大的损失。

疫霉病原菌营养体为二倍体，主要以菌丝状态生长，在无性生活史阶段以多核、无隔膜的二倍体营养菌丝体形态存在，其在含水的介质上产生游动孢子囊。致病疫霉的孢子囊能够从孢囊梗上很容易的脱落下来传播，而大豆疫霉则不能。在适宜的温度下孢子囊可以直接萌发形成侵染菌丝通过寄主植物的自然孔口侵入寄主，孢子囊释放的游动孢子在水中游动，寻找合适寄主组织，然后休止停留后侵入。休止的游动孢子萌发产生一个芽管，然后形成附着胞侵入寄主^[1]。

绝大多数疫霉菌属于半活体营养菌。在活体营养阶段，芽管通过吸器将细胞膜推入寄主细胞产生直接的寄主-病原菌接口^[2]；吸器分泌大量的酶或效应蛋白抑制寄主的防卫反应^[3,4]。根据效应分子在寄主中的靶标位置，可将其分为质外体效应分子(apoplastic effects)和细胞质效应分子(cytoplasmic effects)。胞内效应因子主要包括rxlr和crinkler (crn) 两类。其中rxlr效应分子蛋白序列氮端有一段保守的rxlr（r，精氨酸；x，任意氨基酸；l，亮氨酸；r，精氨酸）蛋白基序，负责将效应因子转运到寄主植物细胞^[5,6]。当寄主植物中含有与效应因子对应的抗病蛋白时，效应因子可被寄主植物识别，激发效应子触发的免疫反应(effect-triggered immunity, eti)。研究发现，植物病原卵菌rxlr效应基因功能呈现出多样性特点^[7,8],即具有抑制bax诱导的细胞死亡功能、抑制pti、eti功能以及诱导细胞死亡、协同作用调控植物防卫反应等功能。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标：1) 明确辣椒疫霉效应分子rxlr207对植物抗病性的影响。

2) 研究辣椒疫霉效应分子rxlr207在病原菌与寄主互作过程中的作用。

研究内容：1) 辣椒疫霉效应分子rxlr207的克隆与载体构建 2) 农杆菌介导的拟南芥遗传转化与筛选3) rxlr207沉默转化子的致病性测定4) 明确rxlr207亚细胞定位 拟解决的关键问题：（1）克隆得到辣椒疫霉效应分子rxlr207的基因组全序列，并将其顺利构建到pfast/g01表达载体上。

3. 研究的方法与方案

研究方法：1、 克隆辣椒疫霉效应分子rxlr207基因2、 构建双元表达载体3、 利用农杆菌介导进行稳定转化4、 利用相应的抗生素为指标筛选阳性植株5、 利用peg介导的方法转化原生质体6、 利用菌丝块接种烟草叶片及实时定量的方法分析沉默转化子菌株在致病性7、 利用农杆菌介导的植物瞬时表达技术进行亚细胞定位技术路线：实验方案：1、 辣椒疫霉与拟南芥的培养辣椒疫霉（phytophtha capsici）菌株在10 （v8 1caco3）固体培养基（1.5agar powder）于25℃培养、保存。

野生型拟南芥col-0，在温室(18-23c,14h 光照/d、10h黑暗 /d交替)中种植；2、 辣椒疫霉rna的提取与cdna的合成将辣椒疫霉菌株移植于v8平板上，在28生化培养箱内培养3天后，取10块直径为4mm的菌块移植于盛有20mlv8液体培养基的培养皿中，于28恒温摇床振荡培养3天，过滤菌丝，放研钵内加液氮研磨至粉末状。

然后使用试剂盒（omega fungal rna kit）提取rna,并反转录合成cdna。

4. 研究创新点

本实验有如下特色和创新之处：

1 研究意义重要

辣椒疫霉病发病快，蔓延迅速，病程期短，防治困难，常造成辣椒大面积减产甚至绝收，在我国吉林、辽宁、青海、河北、北京、云南、甘肃、陕西、上海、浙江、湖南、江苏、江西等地均有发生，但是目前我国对该类病害还缺乏有效的控制策略。本项目通过对辣椒疫霉效应因子的研究，为寻找新的杀菌剂作用靶标，设计新的疫病控制策略提供理论指导。

5. 研究计划与进展

2015年7月 克隆辣椒疫霉效应分子RxLR207基因2015年8月 构建双元表达载体2015年9月 利用农杆菌介导进行稳定转化2015年10月沉默转化子的致病性测定2015年11月亚细胞定位2015年10-2016年5月 利用相应的抗生素为指标筛选阳性植株