1. 研究目的与意义
HCPTC蛋白是我室前期构建的重组热休克蛋白。
前期实验研究发现，HCPTC蛋白具有抗炎和调节脂质双重功效，有助于减轻动脉粥样硬化损伤。
血管内膜损伤是动脉粥样硬化产生的先决条件。
2. 文献综述
血管内膜损伤与动脉粥样硬化
徐 艳 047112221
摘 要：动脉粥样硬化动物模型的建立对研究动脉粥样硬化的发病机制、探索治疗对策和研发防治药物有着重要的作用。作者通过建模探讨热休克蛋白对动脉粥样硬化血管损伤的影响，初步探讨热休克蛋白通过免疫系统干预动脉粥样硬化的可能机理。
3. 设计方案和技术路线
研究方案
1.血管内膜损伤大鼠模型的建立
实验大致步骤：
①选取体重在（30050）g的大鼠，预先给予高脂饮食。按3ml/kg腹腔注射水合氯醛使之麻醉。
②把大鼠麻醉后用绳子固定在手术台上，根据颈动脉搏动确定颈动脉的位置，沿颈动脉走行纵向切开皮肤。
③用弯止血钳钝性分离组织，并以自制拉钩牵拉开皮层和基层，使颈动脉充分暴露，分离出颈动脉，分离长度大约1.5-2cm，分离时动作要轻柔，不得用刀剪等锐利器械，以防损伤血管和神经，特别在分离神经时动作不仅要轻，而且不能大幅度牵拉，以避免对大鼠产生较大的刺激。
④结扎颈动脉前先穿两根手术线备用，选择4-0号手术缝合线做结扎。结扎颈动脉的远心端，结扎时要尽量靠近远头端，结尽量打牢。
⑤提起颈动脉近心端的备线，向心方向轻轻牵拉，以阻断动脉血流为止，然后用止血钳夹住备线两端，以止血钳的重力固定备线位置，使颈动脉血流保持被阻断状态。
⑥起颈动脉远心端打结的缝合线处，用眼科剪向心方向剪一V型口，注意不要把颈动脉剪断，剪开部分不要超过颈动脉直径的1/2，最好控制在1/3左右。
⑦V型口剪好后，迅速将打磨的注射器尖端插入颈动脉，然后沿内壁转圈后拔出，用医用胶粘合伤口，将止血钳放开，恢复血流。
⑧用敷料镊轻轻使血管，肌肉恢复原位，缝合皮层。
⑨术后一周按3ml/kg腹腔注射青霉素、链霉素。
2.HCPTC蛋白的干预作用研究
评价方法：
①通畅率检查：术后每日观察颈部伤口有无出血、感染、肿胀等情况,并用食指触诊检查动脉搏动情况。
②组织学和损伤量化：切除损伤部位的血管，放在分级的乙醇中脱水，然后在二甲苯中清洗，再包埋在石蜡中。靠中间取7微米厚部分用苏木精和伊红染色、镜检观察内膜状态。
生化指标检测: 大鼠下腔静脉血做生化指标检测，观察血糖、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白含量。
技术路线
造血管内膜损伤大鼠模型 |
大量查阅相关文献 |
整理水平、细胞分子水平观察血管内膜状态 |
重组热休克蛋白对大鼠滴鼻给药 |
4. 工作计划
2022.1-2022.2 文献调研及实验准备
2022.2-2022.3 血管内膜损伤大鼠模型的建立
2022.3-2022.5 HCPTC蛋白的干预作用研究
5. 难点与创新点
HCPTC蛋白是我室前期构建的重组热休克蛋白，具有抗炎和调节脂质双重功效。血管内膜损伤是动脉粥样硬化产生的先决条件。HCPTC蛋白是否可以干预血管内膜的早期损伤尚不清楚。本课题就此问题进行研究，探讨HCPTC蛋白发挥治疗作用的应用条件，为后期的抗动脉粥样硬化的深入研究奠定基础。
