1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
本课题的意义:
小菜蛾是一种世界性害虫,在我国各省蔬菜产区均有危害,尤其是南方地区更为严重。为了准确的掌握小菜蛾抗药性的发展动态,及时有效的提出抗性害虫的综合治理措施,减轻小菜蛾对我国农业生产带来的危害,必须加快研发小菜蛾抗药性的快速分子检测技术,以期在抗性未爆发之前做到早期预警,为田间害虫治理赢得主动。本课题以新型杀虫剂茚虫威为检测对象,在分子水平上测定种群携带抗性等位基因突变频率,为茚虫威的合理使用提供重要参考依据。
国内外研究概况:
2. 研究的基本内容和问题
研究的目标:
1、根据抗性监测的结果,制订针对性的田间小菜蛾化学用药方案。
2、明确田间种群对茚虫威的抗性机理:各田间种群的突变频率与其抗性水平的性关性;各田间种群小菜蛾的基因表达量与其抗性水平的性关性。
3. 研究的方法与方案
研究方法:
1、田间抗性调查。参照Shelton等(1993)的浸叶法。取用洁净的甘蓝(Brassica oleracea)叶片,切成直径6.5cm的圆片(不含主叶脉)。设置5-7个药剂浓度,并以清水(含0.5 TrionX-100)做空白对照。每个浓度4次重复,每个重复处理10头试虫。将叶片在药液中浸泡10秒后取出,晾干的叶片垫在培养皿中,每个重复处理10头3龄中期试虫,覆盖双层吸水纸后盖上培养皿上盖,并用标签注明药剂名称和浓度,倒置于培养箱或温室中。处理后试虫的饲养条件:温度251℃,相对湿度60-70%,光照比(L:D)16: 8。试虫经多杀霉素处理48h后调查结果,以毛笔轻触虫体,不能自主爬行的视为死亡。数据分析采用PoLo Plus软件计算毒力回归方程的斜率(slope)、标准误、LC50 值及其95%的置信限。
2、采用AXYPREPTM Multisource Genomic DNA Miniprep Kit基因组试剂盒发,分别对不同浓度茚虫威各田间种群单头提取小菜蛾幼虫(每头约7-8mg)基因组DNA。
4. 研究创新点
本课题利用分子检测技术检测小菜蛾田间种群靶标突变情况
5. 研究计划与进展
2014年9-10月份间,采集山东、安徽、江苏、广东等地的田间小菜蛾,进行室内毒力测定;
2014年11-12月份间,完成各地理种群的gDNA提取工作;
2015年2-3月份间,整理数据、总结规律、撰写文章
