1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
Bt毒素有效抑制靶标生物而对脊椎动物及其它生物的无害的特性使得转Bt基因作物在害虫治理对策中发挥着重要作用(Mendelsohn等,2003;Sanahuja 等,2011; Pardo-Lpez等,2013)。
然而Bt作物的广泛种植可能导致靶标害虫在持续的选择压力下,对Bt毒素产生抗性,并且,已经有研究显示,因田间抗性导致Bt毒素对靶标生物仿效下降的现象已经在7种害虫中得到发现,其中有两类害虫对Bt制剂产生了抗性(Tabashnik等,1990;Janmaat 和Myers,2003) ,而 另外五类害虫是Bt作物的攻击目标(Luttrellet ,2004;Van Rensburg ,2007;Tabashnik等,2008;Storer等,2010;; Dhurua 和 Gujar,2011;Gass-mann等,2011)。
Bt抗性的进化严重威胁着Bt作物的应用效益,因此Bt抗性机理的研究对未来Bt作物的可持续应用是十分必要的。
2. 研究的基本内容和问题
目标针对LF256抗性品系的特点,研究ALP1基因表达量上调产生的原因及作用,明确其在抗性产生中有无作用。
内容研究ALP1基因表达量与Bt毒素对棉铃虫BBMV亲和力的相关性通过明确ALP1基因表达量上调与钙粘蛋白r1突变是否连锁,推测其在与钙粘蛋白r1突变不能遗传互补的LF256品系抗性形成中的作用。
拟解决的关键问题ALP1基因表达量上调是否与钙粘蛋白r1突变有连锁关系
3. 研究的方法与方案
研究方法1、ELISA方法: 测定Cry1Ac毒素对棉铃虫BBMV 的亲和力水平2、实时荧光定量PCR: 测定ALP1基因表达量水平3、遗传连锁分析: 通过敏感品系SCD及钙粘蛋白r1突变品系CAD之间分别杂 交,之后F1代与CAD品系回交测定回交后代的基因型与ALP1基因表达量是否有连锁效应。
技术路线1、测定Cry1Ac毒素对棉铃虫各品系BBMV 的亲和力水平测定棉铃虫各品系ALP1基因表达量水平2、连锁分析 我们利用钙粘蛋白r1突变品系CAD的雄虫与敏感品系的雌虫SCD进行杂交,得到F1代的基因型为r1s,之后将F1代个体的雄虫与r1突变品系CAD雌虫进行回交,对回交得到的F2个体进行基因型和ALP1基因表达量的测定并进行统计和分析。
可行性分析 本课题所涉及的实验室棉铃虫饲养技术成熟、表达量测定等基本的研究方法稳定、经验丰富、可行性较强
4. 研究创新点
我们所选取的实验材料LF256品系所携带的抗性基因来自田间,明确ALP1基因表达量上调在其抗性中的作用对其抗性特征及机理的研究进而对田间Bt抗性治理都具有一定的指导意义
5. 研究计划与进展
2014年9月到10月间对研究ALP1基因表达量与Bt毒素对棉铃虫BBMV亲和力的相关性2014年10月到12月份间,构建回交群体,通过明确ALP1基因表达量上调与钙粘蛋白r1突变是否连锁,推测其在与钙粘蛋白r1突变不能遗传互补的LF256品系抗性形成中的作用 2015年1月份,整理分析数据、总结规律、撰写文章
