1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
大豆疫霉已经成为一种非常重要的植物病原物，由其侵染大豆引起的疫霉根腐病是大豆生产中的毁灭性病害之一[1]。而2C型蛋白磷酸酶（PP2C）同2A和2B型蛋白磷酸酶一样是蛋白磷酸酶中十分重要的一类[2],至今已在许多真核生物体内都得到发现和研究[3]。
Gα蛋白是G蛋白三个亚基之一。结合GDP，当G蛋白接受到信号之后构象发生改变，生成GαGTP和Gβγ二聚体，分别激活下游的信号通路。目前在拟南芥中通过对突变体的研究证明，G蛋白能够调控离子通道，控制种子萌发、光反应、细胞分裂及延长，以及对ABA、赤霉素等的反应。并且拟南芥中Gα的直接互作蛋白PLDα1在拟南芥保卫细胞ABA 信号转导途径中起着重要作用[4]。
实验室之前的研究已经证明大豆疫霉体内PP2C的存在，并且与Gα蛋白之间已经证明是互作关系。研究表明，Gα蛋白不仅影响着致病疫霉孢子囊的割裂，还控制着游动孢子的游动能力的形成[5-6]。而大豆疫霉PP2C大豆疫霉沉默突变体孢子囊产量、游动孢子产量及致病性都明显受到影响，所以进一步对其磷酸酶活性检测有着十分重要的意义。
剩余内容已隐藏，您需要先支付后才能查看该篇文章全部内容！
2. 研究的基本内容和问题
目标：
在大肠杆菌中成功原核诱导表达的PP2C，收集蛋白进行磷酸酶活性验证。
内容：
剩余内容已隐藏，您需要先支付后才能查看该篇文章全部内容！
3. 研究的方法与方案
研究方法：
1.PP2C原核表达载体的构建
1)根据PP2C基因序列进行设计上、下游引物，以大豆疫霉菌菌株 P6497 的cDNA为模板，用PCR扩增出相应的 DNA 片段，酶切片段并连接载体。
剩余内容已隐藏，您需要先支付后才能查看该篇文章全部内容！
4. 研究创新点
PP2C作为一类重要的蛋白磷酸酶在卵菌中从来没有被研究过，是创新尝试之举。
5. 研究计划与进展
2014年10月-2014年11月，完成PP2C原核表达和western检测。
2014年11月-2014年12月将纯化的蛋白进行磷酸酶活性测定。
2014年12月以及之后，逐步重复实验，优化条件得到更好的结果。
剩余内容已隐藏，您需要先支付 10元 才能查看该篇文章全部内容！立即支付
