1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
蚊虫是疟疾、丝虫病、登革热和流行性乙型脑炎等多种严重流行病的传播媒介,因此,灭蚊是控制这些疾病传播的重要手段,但目前的灭蚊措施大多依赖化学农药,对人类的健康会产生一些影响,因此寻找替代化学农药的灭蚊方法很有必要[1]。国内外关于灭蚊的研究有很多,但是对贵阳腐霉这种新分离的灭蚊真菌的研究并不深入[2]。贵阳腐霉是在1994年贵阳医学院苏晓庆教授在被感染的蚊幼虫虫体中分离到的一种兼性寄生真菌,证明其为一种具有灭蚊作用[3],对人、畜等非靶标生物无毒无害的微生物,此真菌对环境适应能力强,易于人工大规模培养,因此具有开发利用前景[4]。贵阳腐霉的细胞核存在于菌丝体中,菌丝体存在单双核现象。通过PCR技术及琼脂糖凝胶电泳技术选出单核菌株并培养[5]。经测定人工分离的野生型贵阳腐霉为杂合体,人工培养贵阳腐霉,并利用它产生的游动孢子进行菌落培养,根据菌落大小及形状和分子生物学手段筛选出它的纯合体[6],用该纯合体侵染幼蚊,计算统计蚊虫的死亡数感染数等数据,进一步在感染率,死亡率,持效性等参考数据上比较纯合体与野生型杂合体在灭蚊效果上的区别[7],为贵阳腐霉灭蚊的研究提供依据,完善卵菌单双核研究领域,并且为生物灭蚊特别是真菌灭蚊积累研究经验,进而为蚊虫介导的流行病防治做出贡献[8]。
主要参考文献:
[1]孔祥林; 骆荣; 刘鲜林; 苏晓庆. 贵阳腐霉(Pythium guiyangense Su)菌丝体及无性繁殖阶段的扫描电镜形态学观察[J]. 电子显微学报, 2008(04).
2. 研究的基本内容和问题
课题内容:
贵阳腐霉的细胞核存在于菌丝体中,菌丝体存在单双核现象。通过PCR技术及琼脂糖凝胶电泳技术选出单核菌株并培养。经测定人工分离的野生型贵阳腐霉为杂合体,人工培养贵阳腐霉,并利用它产生的游动孢子进行菌落培养,根据菌落大小及形状筛选出它的纯合体,比较纯合体与野生型杂合体在灭蚊效果上的区别。
研究目标:
3. 研究的方法与方案
本实验采用菌落培养的方法结合PCR,dati染色等分子生物学途径进行贵阳腐霉单核纯合子的筛选,并模拟室外进行灭蚊试验,检测灭蚊活性。
实验流程:
1菌落培养基培养
4. 研究创新点
(1)实验材料方面:本实验采用杀虫真菌贵阳腐霉,其优点在于灭蚊能力强、对环境适应范围广、对非靶标生物安全、易于人工培养等。是一种有广阔发展前景的新型杀虫微生物。
(2)本实验关于贵阳腐霉单双核的筛选的研究是一个新的尝试。
5. 研究计划与进展
研究计划及预期进展
2016.11-2017.1 贵阳腐霉单核纯合子的筛选
2017.2-2017.3 贵阳腐霉单核纯合子的灭蚊活性测定
