1. 研究目的与意义
内容:金欣口服液是我国著名中医儿科专家汪受传教授的经验方,由黄芩、虎杖、桑白皮、麻黄、葶苈子等8味中药组成。
临床研究已证明其对呼吸道合胞病毒(RSV)引起的病毒性肺炎有很好的疗效。
本课题组通过采用细胞培养技术,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性,以利巴韦林为阳性对照,观察金欣口服液中部分有效成分在人喉癌上皮细胞(Hep-2)中对RSV的抑制作用,以治疗指数(TI)为评价指标。
2. 文献综述
中药及中药有效成分治疗病毒感染性疾病的研究进展Chinese medicine and its effective components research progress for the treatment of virus infection12级药学2班 陈冬 042012232摘 要:中药作为天然药物的重要组成部分,在治疗病毒感染性疾病上历史悠久、应用广泛,显示出独特的优势。
防治病毒性疾病的中药大体分为3种类型:从中药中分离的化学单体、单味中药及其提取物和中药复方制剂。
而中药中多糖、黄酮和皂苷类成分是重要的关键活性成分,具有促进细胞生长、增强免疫和抗病毒等多种作用。
3. 设计方案和技术路线
研究方案1. 病毒感染量测定:将病毒用细胞维持液做10倍系列稀释从10-1至10-8,将各稀释度的病毒液接种于单层Hep-2细胞中,并设正常细胞对照组,置37℃、5%CO2培养箱中培养,观察病变程度并记录。
2. 药物毒性测定:在单体成分组分别加入Hep-2细胞已长成单层的96孔细胞培养板中,每孔100μL,每一浓度设置6个复孔,同时设立正常细胞对照组,置37℃、5%CO2培养箱中培养,观察72h,记录细胞病变。
培养结束后,弃上清液,磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗2次,每孔加入MTT(1mg/mL)25μL,于培养箱中避光培养4h,弃上清,每孔加入150μL DMSO,低速振荡15min,使结晶物充分溶解。
4. 工作计划
2022年2月-3月:查阅文献,形成思路,制定实验方案2022年3月-4月:初步实验,实验条件选择2022年4月-5月:进行详细实验研究2022年5月-6月:数据处理及论文撰写
5. 难点与创新点
用Reed-Muench公式计算病毒半数细胞感染量(TCID50)。
细胞存活率=实验孔测定值均值/对照孔测定值均值100%,采用概率单位回归法,计算药物最大无毒浓度供下一步实验。
病毒抑制率=(药物处理组吸光度值-病毒对照组吸光度值)/(正常对照组光密度值-病毒对照组吸光度值)100%。
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