1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
选题的意义：
水蛭作为中药始载于《神农本草经》，2010年版《中国药典》只收载了蚂蟥（Whitmania pigra）、柳叶蚂蟥(Whitmania acranulata)和水蛭(Hirudo nipponica)三种作为水蛭药材的动物基原[1]。本项目的研究对象为蚂蟥，又称宽体金线蛭，该种亦为我国水蛭药材市场的主流品种。随着研究工作的深入，水蛭的野生资源日益枯竭，因此水蛭的人工养殖成了当前迫在眉睫的任务。
细胞的死亡和更新是多细胞生物整个生命过程中不可缺少的环节，可及时清除机体内的多余细胞和受损伤细胞，对各组织器官的发育及免疫系统的建立发挥重要作用。细胞调亡的概念是由Kerr等人提出的，并在哺乳动物中描述了细胞调亡与细胞坏死在本质上的不同之处[2]。细胞凋亡是一种由基因控制的自主的死亡过程，在细胞分化、免疫、器官发育及生物或非生物应激等生命历程中起着关键作用[3-4]。细胞调亡与细胞增殖、分化和衰老一样，也是细胞生命历程中的一个重要环节，通过细胞调亡过程，机体可以更新正常细胞和清除异常细胞，从而维持内环境的稳定。
2. 研究的基本内容和问题
课题研究目标：
（1）明确蚂蟥冬眠期间消化道细胞凋亡情况。
（2）明确相关基因在蚂蟥冬眠期间的表达情况。
3. 研究的方法与方案
研究方法：
1. 运用ANNEXIN-V-PI双染法完成冬眠蚂蟥消化道细胞的流式细胞检测；
2. 运用Caspase试剂盒完成冬眠蚂蟥消化道细胞的生理酶活性检测；
3. 运用实时荧光定量PCR法完成冬眠蚂蟥消化道细胞的分子表达验证。
技术路线：
采集不同冬眠时期蚂蟥消化道样品 |
冬眠蚂蟥消化道细胞凋亡情况研究 |
凋亡率研究 |
实时荧光定量PCR |
ANNEXIN-V-PI双染法 |
凋亡酶活力研究 |
凋亡基因表达研究 |
Caspase家族酶活性检测 |
可行性分析：
（1）本课题研究目的明确，实验设计合理且条理清晰，具有很强的针对性。
（2）本课题所涉及的实验方法成熟，属于经典生化实验，具有很强的可操作性，且实验所涉及的仪器操作较为简便，经指导老师提供，已基本具备。
（3）本课题所需实验材料蚂蟥可由相关基地提供，实验没有过多的时间限制，四季皆可进行，有充裕的时间进行充分研究。
（4）本课题指导教师郭巧生教授具有丰富的蚂蟥研究基础，多次在SCI及核心期刊上发表相关文章，有丰富的经验，能给予我们所需的指导，尽量避免实验过程中的失误。
（5）申请者研究能力强，已完成生物化学相关课程和试验的学习和考核，具备完成本课题所涉及实验的能力。
因此本试验可行性高。
4. 研究创新点
本实验从多个角度，从较为简单的分光光度计测定酶活性，到现代化细胞检测技术和分子表达验证技术相都有涉及，全方面检测细胞凋亡的情况。这三种方法不是三种并不是完全孤立的，而是相互联系、互相验证的。
同时蚂蟥冬眠过程中细胞凋亡的研究进展还处于相对空白阶段，之前并没有学者进行此类实验，具有很强的创新性，能够为蚂蟥的大规模、高质量养殖提供一定的理论依据。
5. 研究计划与进展
2015年10月～2015年12月
做好实验前期准备，熟悉所涉及的实验方法，查阅相关文献，准备开题。
2016年2月～2015年3月
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