1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea, PED）是由猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）引起的一种以呕吐、腹泻和脱水对哺乳仔猪高致死率为主要特征的一种高度接触性肠道传染病。猪流行性腹泻病毒属于冠状病毒科（coronavirrdae）冠状病毒属（coronavirus）的成员。主要引起祝流行性腹泻。各种年龄、各个品种猪均可感染发病，哺乳仔猪、架子猪、育肥猪的发病率可达100%，成年母猪发病率为15%~90%。当前PED发生率居高不下，发病情况也越来越复杂，出现混合感染的现象时有发生，目前备受广大研究者的重视。
近年来，猪流行性腹泻（PED）在全国许多免疫接种猪群中再度出现，甚至是爆发的趋势并伴随着高发病率和新生仔猪高死亡率的流行特征，给全国各地区的养猪业造成了巨大的损失。研究资料初步证实我国目前流行的PEDV野毒株已发生变异，而这也可能是导致现在使用的疫苗无法有效的提供保护的主要原因。对这些普遍存在的野毒株变异程度和分子基础等，尚需更深入的了解。针对该病毒的流行毒株疫苗及诊断试剂的研究与开发对我国乃至全世界养猪业有着十分重要的意义。PEDV人工细胞培养困难，这一直是制约PEDV研究进展的一个重要因素。直到1988年，Hofmann等首次在培养液含胰酶的Vero细胞上成功繁殖出PEDV,并认为胰酶对PEDV纤突糖蛋白的切割作用增强了该病毒对Vero细胞的感染力。此后PEDV的分子生物学研究才得到了较快的发展。PEDV的M基因编码的是糖基化囊膜蛋白（M蛋白），与其他冠状病毒的核苷酸同源性仅为53%~57%。M基因具有很高的保守性，比较适合用于聚合酶链式反应(PCR)检测PEDV的特异性引物设计。由于猪小肠细胞刷状缘含有大量该病毒感染所必需的细胞受体，因此PEDV在病猪小肠绒毛上皮和肠系膜淋巴结上的含量最高，故本试验选择病猪小肠内容物进行猪流行性腹泻病毒的RT-PCR检测。本实验根据PEDV的流行病学和分子生物学特征，对将30份疑似PEDV病例的小肠内容物进行RT-PCR检测，将阳性的样品进行病毒分离，接种在Vero细胞上盲传，然后通过普通RT-PCR检测进行鉴定，是否有病毒在Vero细胞上增殖以获得可以适应细胞的PEDV流行毒株。
参考文献：
2. 研究的基本内容和问题
研究的目标、内容和拟解决的关键问题
目标：
获取目前在猪场流行的新的适应细胞培养的PEDV毒株，为疫苗及流行病学的研究提供基础。
3. 研究的方法与方案
研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析 研究方法： 1.对将30份疑似PEDV病例的小肠内容物进行RT-PCR检测； 2.将阳性的样品进行病毒分离，在Vero细胞上盲传； 3.通过普通RT-PCR检测进行鉴定是否有病毒在Vero细胞上增殖以获得可以适应细胞的PEDV流行毒株。 技术路线：
实验方案及可行性分析： 实验方案同上述，实验器材及试剂易于获取，实验难度适中，实验现象及结果易于观察和分析，实验周期适中。 |
4. 研究创新点
特色或创新之处
本课题的特色及创新之处：
本实验根据PEDV的流行病学和分子生物学特征，对将近期从各地采集的30份疑似PEDV病例的小肠内容物进行RT-PCR检测，将阳性的样品进行病毒分离，接种在Vero细胞上盲传，然后通过普通RT-PCR检测进行鉴定，为当前PEDV的流行病学研究和疫苗研发奠定基础。
5. 研究计划与进展
研究计划及预期进展 研究计划： 本实验根据PEDV的流行病学和分子生物学特征，对将30份疑似PEDV病例的小肠内容物进行RT-PCR检测，将阳性的样品进行病毒分离，接种在Vero细胞上盲传，然后通过普通RT-PCR检测进行鉴定，是否有病毒在Vero细胞上增殖以获得可以适应细胞的PEDV流行毒株。 预期进展：
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