1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
边界病(border disease,BD) 是由边界病病毒(border disease virus) 引起的以新生羔羊发生震颤和被毛异常为特征的一种疾病，最早发现于英格兰与威尔士边界地区，故名。
BDV及其它血清学相关病毒BVDV、HCV是瘟病毒属的三个相关种类。
瘟病毒属病毒属于黄病毒科,是有囊膜的单股正链 RNA 病毒，基因组约为12.3kb，病毒粒子呈圆形，平均直径为46nm,，含有二十面体对称的核衣壳。
2. 研究的基本内容和问题
研究的目标：本研究目的是通过RT-PCR获得BDV E2基因序列，利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统构建重组杆状病毒,获得体外表达的E2蛋白，为进一步研究E2 蛋白的功能、抗体检测方法建立及BDV新型疫苗的开发提供基础。
研究内容：RT-PCR扩增边界病病毒E2蛋白基因，通过酶切克隆入pFastBacHTB中，阳性重组质粒转化DH10Bac，经蓝白菌落筛选，挑取白色菌落提取Bacmid，PCR鉴定，将正确重组的Bacmid转染Sf9 昆虫细胞，获得重组杆状病毒，并鉴定蛋白表达情况。
拟解决的关键问题：1.RT-PCR扩增边界病病毒E2蛋白基因2.重组pFast-E2的构建与鉴定3.重组Bacmid-E2的构建4.转染细胞获得重组病毒
3. 研究的方法与方案
研究方法和实验方案：1.1 BDV E2基因扩增提取BDV病毒基因组RNA，以提取的RNA为模板，加入设计引物进行边界病病毒 E2 基因的RT-PCR扩增。
PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后,在紫外灯下切下含目的条带的琼脂糖块,用DNA快速回收纯化试剂盒回收凝胶中的目的片段。
1.2重组供体质粒的构建与鉴定将目的基因片段和pFastBacHTB载体进行双酶切，进行核酸琼脂糖凝胶电泳并切胶回收酶切产物。
4. 研究创新点
1.杆状病毒表达系统为真核系统，能保证重组蛋白正确的表达和修饰，保持其结构和功能。
2.采用Bac-to-Bac系统，操作简便，筛选较容易。
5. 研究计划与进展
2月1日~3月10日 熟悉课题内容收集资料，收集资料制定总体方案，引物的设计和合成3月11日~3月25日 重组供体质粒的构建与鉴定3月26日~4月15日 重组Bacmid获得4月16日~4月30日 重组杆状病毒的获得与传代扩增5月1日~5月10日 表达重组蛋白及Westernblot鉴定5月10~5月20日 整理试验数据准备论文。
