1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）
文 献 综 述摘要：四氢嘧啶（Ectoine）是一种重要的氨基酸衍生物，不仅是极端微生物在极端环境中生存所必需的，而且在化妆品和医疗行业也有着广泛的应用。
目前四氢嘧啶的生产主要依赖嗜盐菌和四氢嘧啶工程菌，但是嗜盐菌生产过程繁琐且所需的高盐介质加剧了常规钢质发酵罐的腐蚀，增加了废水处理的难度，也提高了生物生产四氢嘧啶的成本，而四氢嘧啶工程菌的产生量又普遍低于嗜盐菌。
本课题着眼于上述问题，以大肠杆菌为底盘，通过四氢嘧啶合成途径关键基因拷贝数优化、启动子优化以及基因组多拷贝整合，构建一株四氢嘧啶高产菌株，为后续工业化生产四氢嘧啶奠定基础。
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2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案
一、要研究的问题目前市场上四氢嘧啶的生产主要是通过嗜盐微生物特别是盐单胞菌的高密度发酵来获得，这个过程操作繁杂，且需要在高盐条件下进行培养，因此对设备要求高，导致其生产价格十分昂贵。
本课题针对该问题希望构建一株四氢嘧啶高产菌株，为后续工业化生产四氢嘧啶奠定基础。
二 二、研究手段本课题先通过质粒表达的方式对四氢嘧啶合成途径关键基因拷贝数比进行优化，然后以大肠杆菌为底盘，利用CRISPR-Cas9技术将四氢嘧啶合成基因簇整合至底盘基因组中并对启动子进行筛选和优化，在此基础上对四氢嘧啶合成基因簇基因组进行多拷贝整合。
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