1. 研究目的与意义
内容：对大黄蛰虫丸的有效脂肪酸作为指标进行分离和含量测定，并观察其对肝癌细胞凋亡的影响。
将已分离测定的成分诱导肝癌细胞，运用MTT染色法、荧光法，通过观察肿瘤细胞凋亡数量及活性验证大黄蛰虫丸中有效脂肪酸是否具有单独的抗肿瘤疗效，验证在整个大黄蛰虫丸抗肿瘤作用中达到何种治疗或辅助水平。
意义：瘤细胞生物学及分子生物学的研究进展，新的肿瘤治疗途径及靶点的发现，为中药抗肿瘤研究提供了新的思路及方法，作用机理得到进一步阐明，主要有以下几个方面：诱导细胞凋亡、中药的细胞毒性作用、调节细胞信号传导、诱导细胞分化、逆转多药耐药、抑制肿瘤细胞增殖、抗氧化作用、抑制肿瘤新生血管形成、对肿瘤致病因子的预防作用和抗突变作用、提高免疫功能、抗侵袭转移。
2. 文献综述
大黄蛰虫丸抗肿瘤活性成分研究进展 摘 要大黄鹿虫丸能抑制肝癌的迅速增长,对癌细胞具有杀伤作用,因此可以延缓这些症状的发生,继而改善患者生存质量。
将大黄蛰虫丸中活性物质进行总结，因其脂肪酸能够作用于肿瘤细胞，所以在论文中进行有效脂肪酸含量测定和细胞培养实验，观察其对肝癌细胞凋亡的影响，并把有效脂肪酸作为含量和功能的指标。
最终验证在整个大黄蛰虫丸抗肿瘤作用中达到何种治疗或辅助水平,进一步完善大黄蛰虫丸的作用机制。
3. 设计方案和技术路线
一、大黄蛰虫丸有效脂肪酸含量测定1、将大黄蛰虫丸中脂肪酸达到有效分离，设计合适分离方案2、 建立液相和紫外分光光度条件，与对照品比对提取方式、 溶剂、时间、料液比、温度的考察3、 方法学建立线性关系考察、精密度、重复性、稳定性、加样回收率实验二、体外细胞凋亡实验1、细胞生物学技术培养MTT法根据吸光度值测细胞相对数量和相对活力2、显微镜技术观察细胞大黄蛰虫丸肝癌细胞培养 热回流提取注入活性脂肪酸 粗脂肪 诱导肝癌细胞 热回流乙醚萃取细胞活力/功能测定 粗脂肪酸检测吸光度 柱层析凋亡细胞数量、活力脂肪酸 液相、紫外分离鉴定分析数据有效脂肪酸脂肪酸除菌及配制结论指标:大黄蛰虫丸有效脂肪酸的含量作为指标 根据细胞数量及活性判断脂肪酸抗肝癌作用
4. 工作计划
2月22日-3月11日文献查阅，资料整理，设计课题3月14日-5月31日购买药品，细胞培养，开展实验研究6月1日-6月10日整理实验材料，分析实验结果，总结论文
5. 难点与创新点
大黄蛰虫丸中活性成分很多，但是其具体药理作用和机制仍不明确，在此，用脂肪酸对肝癌细胞进行试验，且对大黄蛰虫丸的有效脂肪酸作为指标设计合适考察方式进行含量测定， 将已分离测定的成分诱导肝癌细胞，运用MTT染色法、荧光法，通过观察肿瘤细胞凋亡数量及活性验证大黄蛰虫丸中脂肪酸是否具有一定的抗肿瘤疗效，以此验证在整个大黄蛰虫丸抗肝癌细胞中达到何种治疗或辅助水平。
