1. 研究目的与意义
内容:
本论文拟用健康或免疫低下模型小鼠,原代培养脾细胞,加入刀豆蛋白A(ConA)和脂多糖(LPS)2种刺激,同时给予不同浓度(40、80、160 g/mL)的藏木香挥发油,经过不同时间培养后,采用MTT法检测T和B淋巴细胞的增殖,ELISA和Griess法分别检测淋巴细胞分泌相关因子如肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-10(IL-10)和NO的水平,研究藏木香挥发油对小鼠脾脏淋巴细胞体外增值和分泌的影响。
意义:
2. 文献综述
中药的免疫促进调节作用研究进展
周楠楠
摘要:本综述从中药对T淋巴细胞、B 淋巴细胞、天然免疫细胞、细胞因子及免疫器官的促进作用来探讨了中药免疫促进调节作用,并且对中药免疫促进应用前景方面进行了展望。
3. 设计方案和技术路线
设计方案:
1、注射环磷酰胺的小鼠脾脏淋巴细胞的收集和培养:健康的小鼠连续注射40 [mg/(kg.d)]环磷酰胺10d,复制免疫低下小鼠模型。
2、制备小鼠脾脏淋巴细胞:无菌操作分离健康/环磷酰胺小鼠脾脏淋巴细胞并用10%胎牛血清的RPMI1640培养, 200 目细胞筛研碎,离心管收集细胞液,1500 r/min,离心5 min,弃上清,加入红细胞裂解液裂解红细胞,完全培养液(RPMI 1640 10%胎牛血清)终止反应,1500 r/min离心5 min,弃上清,Hanks液洗3次,培养液重悬细胞加入细胞培养皿,37℃5% CO2培养箱培养3 h,收集未贴壁悬浮细胞,1500 r/min离心5 min,弃上清,培养液重悬细胞,调整细胞浓度至(1106) mL,备用;
4. 工作计划
第一阶段:2022.1~2查阅文献,完成综述,制定实验方案,购买药材和动物;
第二阶段:2022.3~4进行预实验、确定实验条件;
第三阶段:2022.4~5进行正式实验研究;
5. 难点与创新点
藏医学是中华民族医学宝库的重要组成部分,是人类宝贵的非物质文化遗产。其中藏木香的应用过程中富含了藏医药学独特的理论和实践经验,具有特殊的应用价值。本文从藏木香挥发油对脾脏淋巴细胞的体外增殖和分泌影响,探究了其免疫调节方面的药效机制,通过对T淋巴细胞和B淋巴细胞分泌NO和TNF-α,验证了藏木香在免疫调节的影响,为今后研究机体免疫调节提供新的方法。
