1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
卵菌可引起发毁灭性的植物病害，如马铃薯晚疫病、瓜菜类霜霉病、烟草黑胫病、茄类作物的某些根腐病等，在世界范围内造成巨大的经济损失。
随着测序技术的发展，数个疫霉菌的基因组序列测序已经完成[1-3]，极大的推动了卵菌的研究。
卵菌在与寄主植物互作的过程中，会分泌大量的效应因子进入寄主细胞，从而引起一系列的生理生化反应，如干扰寄主细胞的代谢和防卫反应等，进而促进自身的侵染与繁殖[4]。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标：初步明确辣椒疫霉菌RxLR103在致病中的作用，为进一步揭示RxLR103的作用机制奠定基础，从而为认识疫霉菌的致病机制提供线索。
研究内容：1)RxLR103对植物防卫反应的影响分析；2)辣椒疫霉RxLR103表达模式分析；3)RxLR103亚细胞定位分析；4)RxLR103诱导植物细胞死亡活性分析。
拟解决的关键问题：初步明确辣椒疫霉菌效应因子RxLR103的毒性功能，为认识疫霉菌的致病机制提供线索。
3. 研究的方法与方案
研究方法：1)RxLR103各种表达载体的构建；2)利用农杆菌介导的植物瞬时表达技术，分析RxLR103对植物防卫反应的影响；3)激光共聚焦显微观察RxLR103的亚细胞定位；4)利用农杆菌介导的植物瞬时表达技术分析RxLR103诱导细胞死亡的活性。
技术路线：RxLR103对植物防卫反应的影响分析辣椒疫霉RxLR103表达模式分析RxLR103亚细胞定位分析RxLR103诱导植物细胞死亡活性分析实验方案：一、种植和培育本氏烟，在温室（16 h光照、25 ℃；8 h黑暗、20 ℃）中种植，供实验所用；二、制备大肠杆菌DH5α和农杆菌GV3101感受态细胞；1．大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备：① 从甘油菌中活化大肠杆菌，37 ℃（尽量划出单菌落）；② 挑单菌落摇菌（LB培养液，MgSO4 20 mM终浓度），37 ℃ 200 rpm过夜；③ 扩培1:50或1: 100接种于l00 mL LB (LB液，MgSO4 20 mM) 22 ℃ 4 h左右；④ 待OD600=0.2-0.3时，至于冰上10 min；⑤ 4 ℃ 3000 rpm 10 min收集菌液，弃上清；⑥ 用8 ml液体悬浮（0.6 ml DMSO 7.4 ml TB）；⑦ 80 ul分装，冰上操作，分装后迅速放于-70 ℃保存；2．农杆菌GV3101感受态制备：① 从-70 ℃冰箱中取出GV3101甘油菌，用接种针在不含抗生素的LB平板上划线，30 ℃培养48 h，生长出单菌落；② 牙签点新菌落于4 ml LB培养液中30 ℃ 200 rpm振荡培养2 d，取3 ml 培养液于200 ml三角瓶中150 rpm振荡培养8 h至OD600=0.8后，冰上放置10 min；③ 分装入50 ml离心管中，天平平衡，5500 rpm 4 ℃离心10 min；④ 弃上清，用10 ml预冷的灭菌超纯水重悬，重悬尽量彻底无小块沉淀。
天平平衡，5500 rpm 4 ℃离心10 min；⑤ 重复④过程3次；⑥ 弃上清，加入2 ml 15%的甘油，用移液器轻轻吸打使细胞重悬；⑦ 冰上分装100 μl细胞重悬液于预冷的1.5 ml EP管中；⑧ 液氮速冻，于-70 ℃冰箱保存备用。
4. 研究创新点
本研究有如下特色和创新之处：1)实验材料方面：本研究利用辣椒疫霉菌-本氏烟互作模式体系，开展疫霉菌RxLR效应因子毒性功能的研究，为后续深入研究效应因子的作用机制提供了便利。
2)实验方法方面：本研究利用农杆菌介导的瞬时表达技术，在本氏烟上开展效应因子毒性功能的研究，该方法简便、易操作，并适合于大规模高通量的效应因子功能分析。
5. 研究计划与进展
2014年9月 本氏烟等实验材料的准备以及RxLR103表达模式分析；2014年10月RxLR103各种表达载体的构建；2014年11月RxLR103亚细胞定位及诱导植物细胞死亡活性分析。
