稻曲病菌T-DNA插入突变体B766中厚垣孢子形成相关基因的克隆开题报告

 2023-02-10 04:02

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

由Ustilaginoidea virens (Cke.)Tak.(有性态:Claviceps oryzae-sativae Hashioka)引起的稻曲病已成为影响我国水稻生产的重要病害之一(王洪凯和林福呈,2008)。

随着优质高产水稻的大面积推广和施肥水平的相应提高,稻曲菌在我国各主要水稻种植区大面积发生且危害日趋严重(王疏等,2010;杨健源等,2011)。

稻曲病菌危害水稻穗部,在稻粒上形成褐色至墨绿色的稻曲球,并可使邻近稻粒的垩白质和粒重下降(徐传雨和谢关林,2001;施辰子等,2003),发病重的年份可导致减产30%以上(王疏等,2010);另外,稻曲球含有对人畜有剧毒作用的生物碱毒素(Li et al., 2006;吕仕琼等,2010),严重影响稻米品质。

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2. 研究的基本内容和问题

研究目标:克隆获得稻曲菌突变体B-766中与厚垣孢子形成相关基因。

研究内容:1)明确稻曲菌突变体B-766中T-DNA拷贝数;2)利用TAIL-PCR等方法获得T-DNA插入位点相关基因;明确T-DNA插入位点相关基因表达情况,以此分析明确厚垣孢子形成基因。

拟解决的关键问题:明确稻曲菌厚垣孢子形成相关基因,为进一步阐明稻曲菌厚垣孢子形成机制打下基础。

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3. 研究的方法与方案

研究方法:通过southern杂交明确稻曲菌突变体B-766中T-DNA拷贝数;2)利用TAIL-PCR等方法获得T-DNA侧翼序列,与稻曲菌基因组数据库进行比对后分析T-DNA插入位点基因;通过Real-time PCR方法明确T-DNA插入位点相关基因表达情况。

技术路线:可行性:方法可行:通过正向遗传学方法,如通过T-DNA插入突变体获得特异生物学性状相关基因,是经典的研究基因功能的方法。

技术可行:实验室已建立了稳定的稻曲菌DNA和总RNA提取方法、southern杂交、TAIL-PCR和Real-time等技术方法。

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4. 研究创新点

研究材料从1万余份稻曲菌T-DNA突变体中筛选获得,有一定的特异性和稀缺性;通过正向遗传学研究方法克隆到厚垣孢子形成的关键基因,为揭示稻曲病菌厚垣孢子形成分子机制提供了一个可行的切入点。

5. 研究计划与进展

2014年8月:通过southern杂交方法获得稻曲菌突变体B-766中T-DNA拷贝数。

2014年9月:利用TAIL-PCR等方法获得T-DNA侧翼序列,与稻曲菌基因组数据库进行比对后分析T-DNA插入位点基因2014年10月:通过Real-time PCR方法明确T-DNA插入位点相关基因表达情况;总结试验数据,并撰写论文。

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