猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2基因PCR-RFLP分析开题报告

 2023-02-12 12:02

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起猪的一种重要传染病,给世界养猪业带来了巨大的经济损失。根据病毒血清交叉中和试验和病毒基因序列分析,PRRSV分为欧洲型和美洲型,而美洲性PRRSV基因有高度变异性,尤其是病毒的ORF5基因和NSP2基因,而且不同的PRRSV株之间在毒力、基因序列和抗原性等方面都存在较大差异。我国自1996年证实有该病存在以来,已有不少关于我国 PRRSV分离株的报道。探讨 PRRSV 各分离株基因之间的相互关系及变异规律成为研制有效的PRRSV疫苗的关键。

国外对PRRSV的ORF5基因PCR-RFLP分析,其中Masumi TAZOE等总共利用了5种限制性内切酶,总共得到了14种RFLP 模式,看出PRRSV毒株发生了较大变异。

本实验通过对国内部分PRRSV分离株的 RT-PCR-RFLP分析,研究 PRRSV 的基因变异和基因亚型,为防治我国 PRRSV 提供理论依据。同时,通过确定PRRSV的RFLP模式,为PRRSV 分子流行病学调查提供了有利的工具;而且,在多株 PRRSV 混合感染时,为鉴定该毒株基因类型也起重要作用。

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2. 研究的基本内容和问题

研究目标:

通过对PRRSV部分分离株ORF5基因PCR-RFLP分析,能够探讨 PRRSV 各分离株基因之间的相互关系及变异规律,为研制有效的PRRSV疫苗提供依据。

研究内容和拟解决的关键问题:

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3. 研究的方法与方案

1、 毒株

毒株为PRRSV经典强毒株、经典弱毒株、疫苗毒株以及实验室分离的地方送检的PRRSV阳性毒株。

2、 酶和试剂

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4. 研究创新点

本研究在前人研究的基础之上,再进一步增加内切酶的种类,并结合新出现的PRRSV毒株,以得到更到更加精确的RFLP模式,对不同毒株进行分类区别。本研究除了对ORF5处的基因进行对比外,还将进一步考虑对比NSP2处的基因。

5. 研究计划与进展

2月下旬至3月中旬:文献阅读及预实验

3月下旬至5月上旬:对PRRSV阳性病料的ORF5基因进行RT-PCR-RFLP分析

5月上旬至6月:分析整理实验数据,整理PRRSV的RFLP模式,并进行分析,总结出其变化的规律,撰写论文。

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