1. 研究目的与意义
随着生活水平的逐步提高，对疾病的诊断需求越来越多。近年来，人们的体检率升高了20%-30%，所以体外检测试剂需求越来越多，体外监测试剂具有检测方便的优点，而本课题对一种体外生物检测试剂的制备进行研究。
碱性磷酸酶是广泛分布于人体各脏器器官中，其中以肝脏为最多其次为肾脏，骨骼、肠、和胎盘等组织经肝脏向胆外排出的一种酶。血清中的ALP主要来自肝脏和骨骼，生长期儿童血清内的大多数来自成骨细胞和生长中的骨软骨细胞，少量来自肝。碱性磷酸酶水平的变化与肝脏和骨骼的各种病理状态有关。
检验原理：磷酸对硝基苯酚（4-NPP）在碱性磷酸酶（ALP）作用下，将其磷酸基转移到2-氨基-2-甲基-1-丙醇（AMP）受体分子上，释放出的对硝基苯酚（4-NP）在碱性溶液中分子重排形成黄色醌，可在405nm下检测，黄色醌形成速率与ALP活力成正比。
2. 课题关键问题和重难点
（一）、课题关键问题
1、碱性磷酸酶检测试剂的空白吸光度（光径1.0cm，波长405nm）≤1.0。
2、制备出的检测试剂的线性范围必须在10-750U/L，线性相关系数r≥0.990。
3. 国内外研究现状（文献综述）
碱性磷酸酶是非特异性磷酸单酯酶, 可以催化几乎所有的磷酸单酯的水解反应, 生成无机磷酸和相应的醇、酚、糖等, 还可以催化磷酸基团的转移反应。最适pH为7.6-9.9，ALP定位于生物膜，为基质小泡和质膜的标记酶。ALP存在于除高等植物外几乎所有的生物体内, 可直接参加磷代谢 ,在钙、磷的消化、吸收、分泌及骨化过程中发挥了重要的作用。1912 年 Grosser等分离到(碱性)磷酸酯酶;1934年，Davis 提出了碱性磷酸酶这一命名;1962年,等证实ALP是一种金属酶;1981年, Bradshaw测定了大肠杆菌ALP氨基酸全序列,并克隆了大肠杆菌 ALP 的基因;之后多种生物ALP的基因相继被克隆,近些年对ALP的结构、作用机制和功能的研究越发深入,使ALP的应用更加广泛。
ALP在生物体内分布广泛,以小肠粘膜和胎盘的含量最高，肾脏和骨骼次之,肝、肺、脾再次之,肌肉和红细胞膜上则无ALP活性 ,健康人体的血清ALP由骨型、肝型和小肠型组成。ALP的生理功能至今尚未了解，根据 ALP的分布推测其作用可能有: (1) 在小肠粘膜中 ,主要分布于细胞的微绒毛上 ,可能与某些物质的吸收有关; (2) 在肾脏中存在于近曲小管的刷状缘上 ,可能与其重吸收功能有关; (3) 在肝脏中 ,主要存在于实质细胞的毛细胆管面 ,可能参与肝细胞的排泄功能; (4) 骨骼中的软骨细胞、成骨细胞有 ALP活性 ,推测其与成骨作用有关。
ALP在医学和分子生物学等领域有广泛的用途。在临床医学上, 测定血清中 ALP的活力已成为诊断和监测多种疾病重要手段。ALP主要用于阻塞性黄疸 、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等的检查，患这些疾病时，肝细胞过度制造 ALP，经淋巴道和肝窦进入血液，同时由于肝内胆道胆汁排泄障碍 ,反流入血而引起血清ALP明显升高。而血中肠型ALP明显升高可见于各种肠道疾病,也有文献报道某些消化系统疾病、自身免疫性疾病及恶性肿瘤患者血中还可以出现免疫球蛋白复合物型 ALP ,此种ALP同工酶出现的机理尚未清楚。ALP同工酶作为肿瘤组织的一个标志也逐渐为人们所认识 ,如肺脏、睾丸、卵巢、胰腺、结肠和淋巴组织等恶性肿瘤病人血清中含有PLAP 。骨型ALP作为骨代谢异常的标志物越来越受到临床重视;血清骨型ALP活力的定量测定可作为监测骨形成变化的有效参数 ,在其他的骨代谢异常疾病(如骨软化症 、佝偻病等)及早期甲状腺机能亢进的病人、慢性肾衰病人、接受肾脏移植的病人血清中的骨型ALP活性均有不同程度的改变,对骨型ALP活性的检测及动态观察将为疾病的早期诊断、治疗效果的监测 、病情预后等提供有效的依据。
4. 研究方案
首先选定课题，之后进行资料的搜集，一共拟定了四种方案。
方案一：ALP-R1的配制原料为水、4mol的氯化氢、AMP缓冲剂、NaN3
R2的配制原料为AMP缓冲剂、EDTA、七水合硫酸锌、四水乙酸镁、NaN3
5. 工作计划
第一阶段（寒假）：进去毕设所在公司实习，学习毕设需要用到的仪器，学习数据处理和产品研发方法和流程。
第二阶段（3月3日之前）:根据公司实验研发的进度，确定毕设课题，查阅文献，完成开题报告。
第三阶段（3月31日之前）:配制实验所需的溶液，进行检测优化，及时记录数据，完成毕设所作课题的所有实验。整理分析数据，完成论文初稿。
