五株乳杆菌培养液体外抑菌筛选试验开题报告

 2023-02-12 12:02

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

乳杆菌Lactobacillaceae即是乳酸杆菌,为细菌的一科,耐酸性强,最适pH值为5.5~5.8,甚至更低。在37℃下生长良好,不耐高温,当80℃高温处理5min后,乳杆菌将损失70%~80%[1]。革兰氏染色呈阳性,无芽孢杆菌。乳杆菌科仅包括乳杆菌属一属,该属细菌分解糖的能力强[2],分解糖类产生乳酸,但是其分解蛋白质类的能力极低。

乳杆菌是一种常见的益生菌[2],对其在食品、医学、农业中的影响研究较多[3~9]:把它加入饲料中,在提高动物生长速度、增强机体免疫力[10]、预防和治疗疾病、提高动物存活率、改善饲料利用率[11]等方面发挥着显著的作用,其作用机理的研究已越来越受到人们的重视。

本课题试验对现有七株已知的乳杆菌:Lactobacillus acidophilus嗜酸乳杆菌、L. rhamosus 鼠李糖乳杆菌、L. reuteri 罗伊氏乳杆菌、L. plantarum 植物乳杆菌、L. breris短小乳杆菌、L. garvieae格氏乳杆菌、L. Salivarius唾液乳杆菌,用它们单个或组合在体外培养抑制五种目标菌:白色念珠菌(Canidia. albicans)、无乳链球菌(S.agalactiae)、肠埃希氏菌(E. coli)、克雷伯氏杆菌(k.pneumoniae)、奇异变形菌(P.mirabilis)。

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2. 研究的基本内容和问题

现有七株已知的乳杆菌:Lactobacillus acidophilus嗜酸乳杆菌、L. rhamosus 鼠李糖乳杆菌、L. reuteri 罗伊氏乳杆菌、L. plantarum 植物乳杆菌、L. breris短小乳杆菌、L. garvieae格氏乳杆菌、L. Salivarius唾液乳杆菌,用它们单个或组合来抑制五种目标菌:白色念珠菌(Canidia. albicans)、无乳链球菌(S.agalactiae)、肠埃希氏菌(E. coli)、克雷伯氏杆菌(k.pneumoniae)、奇异变形菌(P.mirabilis)。

通过试验确定上述七株乳杆菌的单个及组合对各种目标菌的抑菌效果,寻找抑菌性较好的某种乳杆菌或组合,解决动物饲养中的部分细菌感染问题。

将购买的乳杆菌分别用肉汤培养基活化,37℃摇床培养36h后,菌液用50%的甘油保种。

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3. 研究的方法与方案

本课题主要采用以试验得到结果的方法,在试验的过程中,用了分子生物学、微生物学、生物统计学等学科的操作方法。

乳杆菌的复苏:

购买的为乳杆菌粉,需要将其接种到乳杆菌肉汤培养基(成分(g/L):胨化乳:15.0、酵母浸粉:5.0、磷酸二氢钾:2.0、葡萄糖:10.0、番茄浸出粉:2.5、吐温80:1.0。)中37℃震荡培养36h进行复苏活化。复苏的菌液和50%的甘油以1:1的比例混匀-20℃保种待用。剩下的乳杆菌粉密封装好-80℃封存。

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4. 研究创新点

本课题首次对七株乳杆菌:Lactobacillus acidophilus嗜酸乳杆菌、L. rhamosus 鼠李糖乳杆菌、L. reuteri 罗伊氏乳杆菌、L. plantarum 植物乳杆菌、L. breris短小乳杆菌、L. garvieae格氏乳杆菌、L. Salivarius唾液乳杆菌及其不同的组合对五种目标菌:白色念珠菌(Canidia. albicans)、无乳链球菌(S.agalactiae)、肠埃希氏菌(E. coli)、克雷伯氏杆菌(k.pneumoniae)、奇异变形菌(P.mirabilis)的致死效应进行检测,经过多次的试验,根据抑菌圈的大小,可以找出抑菌最好的菌种或者组合,确定乳杆菌的分泌产物可以实现高效广谱的抑菌,可在临床上得以推广与应用。

5. 研究计划与进展

2014.01~2014.02底,预试验

预期结果:初步确定乳杆菌是否有抑菌性。

2014.03初~2014.03底,单一菌株的抑菌试验

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