1. 研究目的与意义
一、毕业设计的内容 通过双酶切合成好的基因片段和表达载体，胶回收后使用T4连接酶连接构建成新的表达质粒，转化大肠杆菌后挑单菌培养，用质粒提取试剂盒提取质粒并送测序，在测序结果正确后，将成功构建的质粒用于转染CHO细胞使其表达，纯化出抗体蛋白后，最后进行理化和活性的检测鉴定。
二、意义抗体作为药物用于疾病治疗始于19世纪末，1975年Kohler和Milstein建立杂交瘤技术制备鼠单抗，1982年鼠单抗首次应用于人体治疗，但由于鼠单抗的毒副作用使其在人体治疗中的应用受到了限制。
20世纪80年代以后出现了各种基因工程抗体以及人源化抗体。
2. 文献综述
文献综述摘要：抗体作为药物用于治疗疾病已有很长历史，随着抗体立体结构的阐明和分子生物学技术的发展，抗体从最初的鼠单抗发展到鼠单抗人源化改造、基因工程抗体，人源化抗体。
同时人们利用分子生物学技术改良抗体性能使之有效到达靶部位，提高抗体效应功能[1]。
因此，抗体药物具有广阔应用前景，将在人类疾病治疗中发挥重要作用。
3. 设计方案和技术路线
三、研究方案3.1表达载体的构建将合成的含有重链片段的质粒使用限制性内切酶HindIII和NheI双酶切，回收酶切得到的约450bp处条带，得到重链DNA片段，将合成的含有轻链片段的质粒使用限制性内切酶HindIII和BsiWI双酶切，回收酶切得到的约400bp处条带，得到轻链DNA片段。
将重链载体和轻链载体分别使用限制性内切酶HindIII和NheI和限制性内切酶HindIII和BsiWI双酶切，回收目的大片段，分别得到用于构建重链质粒的载体，用于构建轻链质粒的载体。
利用T4连接酶连接载体和片段，构建成新的表达质粒，将重链表达质粒和轻链表达质粒分别转化到大肠杆菌DH5α后挑单菌培养，用质粒提取试剂盒提取并送测序。
4. 工作计划
第一阶段：2022.1-2查询相关资料、阅读整理文献、整理实验思路并设计实验方案；第二阶段：2022.3初步试验、实验条件选择；第三阶段：2022.4-5进行实验研究；第四阶段：2022.6整理实验记录、总结实验效果、完成毕业论文并准备答辩。
5. 难点与创新点
人源化抗体是在嵌合抗体的基础上进一步减少鼠源成分，以及保留鼠抗体CDR区，其余全部替换成人抗体相应部分，这种经过改型抗体，人源成分达90%，即通常所指的人源化抗体。
在疾病治疗中，人源化抗体之所以优于鼠源性抗体，不仅因为抗体中鼠源性成分的减少降低了机体的免疫排斥反应，还在于人源化抗体中Fc段能够诱发机体的效应机能或效应细胞，后者对靶细胞具有杀伤作用。
人源化抗体的另一个优点是它在体内的半衰期长，鼠性抗体的半衰期不到20小时，而人源化抗体可达数天甚至有时接近21天。
您可能感兴趣的文章
- 石墨相氮化碳二维纳米片在基因递送的应用开题报告
- 缺氧响应型超分子一氧化氮纳米发生器的制备开题报告
- Yap与Hedgehog信号在药物诱导肝纤维化中的相互作用开题报告
- Role of talin-1 in transition of liver fibrosis to cirrhosis开题报告
- 缺电子3-烯基吲哚参与[4 2]环加成反应研究开题报告
- PET-CT多肽用螯合剂中间体的合成研究开题报告
- 含锰的多巴胺交联透明质酸水凝胶的制备及表征开题报告
- 可见光诱导下重氮酯参与的卡宾插入反应研究开题报告
- 可见光催化的α,β-不饱和羰基化合物的硼氢化反应开题报告
- 用于高效脱氧脱水反应的金属催化剂设计合成开题报告
