万寿菊同源多倍体种质的诱导与鉴定开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

一．本课题的意义、国内外研究概况、应用前景等1.研究意义万寿菊中含有多种生物活性成分，可以应用于医药、化妆品、色素、食品添加剂、饲料等各领域。

随着经济的发展，万寿菊的需求量呈不断上升的趋势，目前，市场上万寿菊的需求逐渐呈现供不应求的现象。

基于植物同源多倍体具有适应环境的能力更强、抗逆性强、生物学产量增加、次生物质增加等特点，尝试利用秋水仙素诱导万寿菊同源四倍体植株，以期提高万寿菊植物体内叶黄素成分的含量，使万寿菊作为叶黄素的提取原料可以更好的应用于相关领域。

2. 研究的基本内容和问题

二．研究的目标、内容以及拟解决的关键问题1.研究目标（1）建立万寿菊无菌快繁体系；（2）在建立无菌快繁体系的基础上，利用秋水仙素离体诱导的方法获得10-15个同源四倍体株系；（3））发表研究论文1篇，申请相关发明专利1项。

2.研究内容探究建立万寿菊无菌快繁体系的适宜条件，并在此基础上，用秋水仙素溶液诱导万寿菊四倍体，探究诱导的适宜条件。

3.拟解决的关键问题实验室具备所有开展该项研究的设备、仪器、药剂、空间等条件。

3. 研究的方法与方案

三．研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析1.研究方法（1）发芽、不定芽、增殖培养基的筛选方案表1 发芽培养基和不定芽诱导培养基编号 6-BA（mg·L-1） NAA（mg·L-1）①② 2.0 1.0② 2.0 0.5③ 2.0 0.2④ 1.0 0.5⑤ 1.0 0.2⑥ 0.5 0.2（3）生根培养基筛选方案表2 生根培养基编号 IBA（mg·L-1） NAA（mg·L-1）11 1.0 1.02 1.0 0.53 0.5 0.24 0.5 0.55 0 0.56 0.5 0（4）多倍体诱导方案表3 不同浓度秋水仙素溶液诱导多倍体编号 秋水仙素浓度（%） 浸泡处理时间（h）1 0.05 122 0.05 243 0.05 364 0.15 125 0.15 246 0.15 367 0.2 128 0.2 249 0.2 36（5）多倍体鉴定①形态鉴别：植株矮壮、叶片变大、变厚、叶色浓绿的可初步判断为四倍体；②根尖染色体鉴定：对照二倍体根尖染色体为2n=2x=24条，四倍体染色体为2n=4x=48条；③流式细胞仪鉴定：利用流式细胞检测细胞的DNA含量，流程主要是：制备细胞悬浮液通过仪器进入检测系统，然后通过计算机分析，最后绘制出DNA含量的分布曲线图。（6）炼苗移栽炼苗时间设置5个梯度，分别是0、2、5、6、7天。2.技术路线

（1）外植体消毒建立无菌材料；

（2）分别筛选出合适的发芽、不定芽诱导、生根培养基，建立无菌快繁技术体系；

（3）选择长势良好的芽进行多倍体诱导；

4. 研究创新点

四．特色或创新之处（1）材料创新经过在CNKI的系统检索，未见关于药用植物万寿菊以种子为外植体的无菌快繁体系的建立，以及在其基础上获得同源四倍体种质的报道。

（2）技术创新①本项目在建立无菌快繁体系的基础上，进行万寿菊同源四倍体的诱导，一方面可以通过无菌快繁技术提供大量的可供诱导的实验材料，提高工作效率；另一方面，采用离体诱导的方法可以减少诱导过程中嵌合体的产生，增大实验的成功率。

②采用形态鉴别和根尖染色体鉴定相结合的方法对获得的万寿菊多倍体种质进行鉴定，可以有效的排除嵌合体，获得纯合的同源四倍体。

5. 研究计划与进展

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