1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
双歧杆菌是一种重要的益生菌, 在动物肠道内定殖 ,具有营养、免疫、抗感染、延缓衰老的功能。
而由双歧杆菌产生的双歧杆菌素具有抑菌功能,能抑制有害的微生物的生长, 从而促进机体健康。
为了实现工业化生产双歧杆菌素、简化生产工艺、降低生产成本的目的,本试验采用基因工程技术,重组表达双歧杆菌素。
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2. 研究的基本内容和问题
目前畜牧业、食品加工业以及医疗业出现严重的抗生素滥用问题,对人体的健康造成了伤害,引起了社会的广泛关注。
而双歧杆菌素是具有抑菌功能的物质,它作为一种蛋白类物质可以被人体的酶消化,不会引起人体的免疫反应,而且作为益生菌合成的代谢产物,还可以避免化学合成防腐剂在体内残留所引起的危害,因此可作为抗菌物质应用于食品、医药等多个领域。
也因为它的抑菌活性,双歧杆菌素可以代替抗生素使用,解决抗生素滥用的问题。
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3. 研究的方法与方案
本试验以大肠杆菌作为表达系统,pET30a( )作为表达载体,BL21(DE3)作为表达宿主菌,利用DAMP4的在高温、高盐条件下仍然具有可溶性这一特点分离纯化融合蛋白,从而进一步对双歧杆菌素的生物活性进行研究。
这种利用微生物表达系统获得目标蛋白的方法,不仅成本低廉、方法简单,而且可以实现工业化生产。
4. 研究创新点
本试验目标蛋白纯化方法较以往的研究较为新颖,用到的是标签蛋白DAMP4,DAMP4在高温、高盐下仍具有可溶性,利用这一特性分离纯化蛋白,然后用盐酸对融合蛋白的结构中的酸裂解位点进行裂解分离出目的蛋白,最后调节pH使DAMP4析出,将离心上清液冻真空冷冻干燥获得产品。
蛋白纯化技术简单,避免了传统的色谱分析。
5. 研究计划与进展
1.基因的合成(校外生物公司合成)2.重组质粒的构建3.表达系统的选择和构建4.目标蛋白的表达5.蛋白浓度的测定
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