1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
磷脂酶A2(PLA2)是一种催化磷脂二位酰基水解的酶类,在体内发挥多种生理功能,如膜磷脂的降解和代谢、信号传导、宿主防御等[1]。
磷脂酶A2有5种不同的酶型,包括分泌型PLA2(sPLA2)、胞浆型PLA2(cPLA2)、非钙依赖型PLA2(iPLA2)、血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)和溶酶体型PLA2(lPLA2)[2,3]。
其中,分泌型磷脂酶A2(sPLA2)是PLA2中最大的一个亚族,是导致炎性脂质介质产生的关键分子[4]。
2. 研究的基本内容和问题
研究的目标:揭示鲤鱼sPLA2G3的结构、系统发育以及sPLA2G3各个基因在不同组织中的表达情况。
研究的内容: 1. 确定鲤鱼sPLA2G3的基因的结构,分析基因系统发育情况。
2. 克隆sPLA2G3基因,确定组织表达。
3. 研究的方法与方案
研究方法:运用BLAST、线性分析获得鲤鱼sPLA2G3基因序列,使用RT-PCR克隆鲤鱼sPLA2G3基因,运用定量RT-PCR测定该基因在不同组织中的表达情况。
技术路线:使用BLAST和线性分析,在鲤鱼基因组中获得鲤鱼sPLA2G3序列,使用RT-PCR获得cDNA,分析鲤鱼sPLA2G3的基因结构、系统发育情况;使用定量RT-PCR测定sPLA2G3在不同组织中的表达情况。
可行性分析:鲤鱼、草鱼等基因序列均已在相关网站上能获得,斑马鱼的sPLA2G3基因已经可以在网站上找到,因此获得鲤鱼的sPLA2G3基因序列并不困难。
4. 研究创新点
目前,sPLA2G3在鱼类中研究比较少,只有少数鱼类中得到sPLA2G3的基因序列,由于没有揭示鲤鱼的sPLA2G3的结构,目前尚不能确定其在sPLA2第三家族中的分类。
鲤鱼作为我国淡水经济鱼类中的重要代表之一,具有较高的经济价值和营养价值,但目前为止,sPLA2G3在鲤鱼中的研究仍没有报道。
本实验根据斑马鱼的3个sPLA2G3的旁基因,可以预测鲤鱼有6个sPLA2G3的旁基因。
5. 研究计划与进展
研究计划: 1.2017年5月-2017年7月:课题的选定与实验准备阶段(1)查阅大量文献并综合分析国内外鱼类sPLA2G3的研究进展,最终确定课题(2)所需实验试剂、器材的购置与准备(3)实验方案的初步设定 2.2017年7月-2018年3月:实验的正式开展阶段(1)鲤鱼sPLA2G3基因序列的获取和克隆(2)完成构建实时定量RT-PCR方法,测定sPLA2G3的组织表达量。
3.2018年3月-2018年4月:数据收集与整理(1)鲤鱼sPLA2G3基因结构分析(2)鲤鱼sPLA2G3基因的系统进化树(3)鲤鱼sPLA2G3在不同组织中的表达模式图 4.2018年4月:论文初稿的攥写 5.2018年5月:论文修改、定稿及论文答辩 预期进展:预期可顺利得到鲤鱼sPLA2G3基因克隆,基因序列的结构分析,基因在不同组织中的表达规律。
